高效液相色譜儀的工作原理

 

組件高效液相色譜柱這也稱為固定相。這是高效液相色譜機(jī)器的核心，由多種物質(zhì)通常二氧化硅中的一種制成，二氧化硅和過量碳反應(yīng)，碳鏈?zhǔn)欠菢O性的，因此碳鏈越長，色譜柱的非極性越大。含有 18 個(gè)碳鏈的色譜柱是常用的，稱為 C18 色譜柱。高效液相色譜樣品樣品類型因領(lǐng)域和相關(guān)化合物的類型而有很大差異。高效液相色譜可用于分析生物樣本（尿液、血液、唾液和肌肉）、環(huán)境樣本、藥物化學(xué)（藥物）和微生物學(xué)（真菌和細(xì)菌產(chǎn)生的毒素）中的化合物。進(jìn)樣將樣品注入高效液相色譜柱。這曾經(jīng)是手動(dòng)執(zhí)行的，經(jīng)過升級改造后大多數(shù)儀器都能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣，這樣更高效便捷，減少了手動(dòng)輸入并允許更高的檢測量。

 

高壓泵將具有一定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑泵人裝有填充劑的色譜柱(固定相)中，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，樣品中的各組分在固定相和流動(dòng)相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-分解-吸附的分配過程，進(jìn)行分離后依次進(jìn)入檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號或進(jìn)行數(shù)據(jù)處理而得到分析結(jié)果。

 

流動(dòng)相這實(shí)際上只是水和有機(jī)溶劑的混合物。流動(dòng)相之所以得名，是因?yàn)樗苿?dòng)通過色譜柱，同時(shí)從色譜柱中洗脫化合物，化合物通常沿濃度梯度洗脫，非極性溶劑的百分比同時(shí)增加，流動(dòng)相逐漸變得更加非極性。高效液相色譜運(yùn)行高效液相色譜可以以多種模式進(jìn)行。常用的方法稱為反相，在這種模式下，化合物從極性*強(qiáng)的化合物開始，到非極性化合物結(jié)束。對于正相模式，高功率泵將樣品和流動(dòng)相移動(dòng)通過色譜柱，運(yùn)行可能需要 10-60 分鐘。高效液相色譜圖 高效液相色譜圖顯示了化合物從化學(xué)反應(yīng)中的分離，色譜圖是在 254 nm 處查看的。兩個(gè)主峰出現(xiàn)在 8.20 和 9 分鐘，代表具有這些保留時(shí)間的兩種化合物。吸光度單位 (AU) 的數(shù)量顯示在 Y 軸上，而運(yùn)行時(shí)間顯示在 X 軸上。應(yīng)用在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，高效液相色譜通常用作分析生物和環(huán)境樣品是否存在已知化合物（例如代謝物、藥物、毒素、殺蟲劑）的分析工具，并可幫助識別未知化合物。然而，在化學(xué)領(lǐng)域，高效液相色譜通常用于監(jiān)測化學(xué)反應(yīng)以及確定產(chǎn)品的純度。